Разработка и проверка функционирования генетических конструкций для ДНК-вакцины против цирковируса свиней типа 2

  • Лидия Михайловна Кравченко Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь
  • Владимир Антонович Прокулевич Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь
  • Кирилл Валерьевич Кудин Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

Аннотация

Разработан дизайн двух генетических конструкций, которые могут стать основой для создания ДНК-вакцины против цирковируса свиней типа 2. Эти конструкции получены на базе коммерческого плазмидного вектора pVAX 1, одна из них содержит полноразмерную природную открытую рамку считывания капсидного белка цирковируса, а вторая – открытую рамку считывания, соответствующую белку без первых тридцати N-концевых аминокислот. Для амплификации необходимых фрагментов вирусного белка были разработаны соответствующие праймеры. Экспрессию целевых последовательностей выявляли по наличию капсидного белка вируса в культуре трансфицированных клеток млекопитающих. Предварительная оценка возможности кальций-фосфатной трансфекции перевиваемых клеток эпителия эмбриона свиньи позволила установить нецелесообразность ее использования для дальнейших исследований разработанных генетических конструкций. Результаты экспериментов показали, что белок капсида цирковируса свиней типа 2 присутствует в лизатах трансфицированных клеток в низких количествах, при этом содержание укороченного варианта белка выше, чем нативного.

Биографии авторов

Лидия Михайловна Кравченко, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

аспирантка кафедры микробиологии биологического факультета. Научный руководитель – В. А. Прокулевич

Владимир Антонович Прокулевич, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

доктор биологических наук, профессор; заведующий кафедрой микробиологии биологического факультета

Кирилл Валерьевич Кудин, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

научный сотрудник кафедры микробиологии биологического факультета

Литература

  1. Modrow S., Falke D., Truyen U., et al. Molecular Virology. Berlin : Springer, 2013.
  2. Knipe D. M., Howley P. M., Meng X.-J. Fields Virology : in 2 vol. Philadelphia : LWW, 2013. Vol. 2 : Specific virus families.
  3. Liu Q., Tikoo S. K., Babiuk L. А. Nuclear localization of the ORF2 protein encoded by porcine circovirus type 2. Virology. 2001. Vol. 285, No. 1. P. 91–99.
  4. Donnik I. M., Petrova O. G., Isayeva A. G., et al. Klinicheskiye priznaki zabolevaniy assotsiirovannykh s tsirkovirusnoy infektsiyey sviney i soputstvuyushchiye infektsii. Agrarnyy vestnik Urala. 2013. No. 3. С. 20 –23 (in Russ.).
  5. Coban C., Koyama S., Takeshita F., et al. Molecular and cellular mechanisms of DNA vaccines. Human Vaccines. 2008. No. 4. Р. 453– 456.
  6. Popov Yu. A., Mikshis N. I. Genetic (DNA) Vaccines. Problemy osobo opasnyh infektsiy. 2010. No. 10. С. 20–25 (in Russ.).
  7. Prakulevich U. A., Kudzin K. V. Expression of the open reading frame of PCV2 capsid protein in E. coli cells. Mikrobnye biotehnologii: fundamental’nye i prikladnye aspekty : sb. nauchn. tr. : in 5 vol. Minsk : Belaruskaya navuka, 2013. Vol. 5. P. 131–141 (in Russ.).
  8. McPherson M. J., Moller S. G. PCR. Oxford : BIOS Scientific Publisher, 2000.
  9. Primer 3plus. 2006. URL: http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi (date of access: 20.01.2015).
  10. Ausubel F. M., Brent R., Kingston R. E. Current protocols in molecular biology. 2nd ed. New York : John Wiley & Sons, 1993. Vol. 1.
  11. Martin J. Transfecting mammalian cells: optimization of critical parameters affecting calcium-phosphate precipitate formation. Nucleic acids research. 1996. Vol. 24, No. 4. P. 596 – 601.
  12. Enzymatic assay of β-galactosidase. 2011. URL: http://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigmaaldrich/docs/Sigma/Enzyme_Assay/bgalactosidase73.pdf (date of access: 15.05.2016).
  13. Van Emon J. M. (ed.). Immunoassay and other bioanalytical techniques. USA : CRC Press, 2007.
  14. Pereira V. B., Zurita-Turk M., Saraiva T. D., et al. DNA vaccines approach: from concepts to applications. World J. of Vaccines. 2014. Vol. 4. P. 50 –71.
  15. Transfection. 2013. URL: https://worldwide.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/protocols-and-applications- guide/transfection (date of access: 03.05.2016).
  16. Tugizov Sh. M. Strukturno-funktsionalnyy analiz membrannykh belkov virusov v geneticheski transformirovannykh kletkakh : dissertatsiya… doktora biol. nauk : 03.00.06. Moscow, 1996 (in Russ.).
  17. Protocol for calcium phosphate transfection of 293T cells. 2004. URL: http://delangelab.rockefeller.edu/protocols.html (date of access: 03.05.2016).
Опубликован
2018-05-01
Ключевые слова: цирковирус, ДНК-вакцина, цирковирус свиней типа 2, интерфероны, кальций-фосфатная трансфекция
Как цитировать
Кравченко, Л. М., Прокулевич, В. А., & Кудин, К. В. (2018). Разработка и проверка функционирования генетических конструкций для ДНК-вакцины против цирковируса свиней типа 2. Экспериментальная биология и биотехнология, 3, 28-37. Доступно по https://journals.bsu.by/index.php/biology/article/view/2458
Выпуск
№ 3 (2017): Журнал Белорусского государственного университета. Биология
Раздел
Генетика и молекулярная биология

Авторы, публикующиеся в данном журнале, соглашаются со следующим:

  1. Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и предоставляют журналу право первой публикации работы на условиях лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial. 4.0 International (CC BY-NC 4.0).
  2. Авторы сохраняют право заключать отдельные контрактные договоренности, касающиеся неэксклюзивного распространения версии работы в опубликованном здесь виде (например, размещение ее в институтском хранилище, публикацию в книге) со ссылкой на ее оригинальную публикацию в этом журнале.
  3. Авторы имеют право размещать их работу в интернете (например, в институтском хранилище или на персональном сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению и большему количеству ссылок на данную работу. (См. The Effect of Open Access).