Анализ эффективности факторов электротрансформации клеток Bacillus subtilis для инактивации гена aroK путем гомологичной рекомбинации - Юй Чао; Лагодич, Алексей Викторович (Экспериментальная биология и биотехнология, 2021)
Оптимизирован метод гиперосмотической электротрансформации для штамма Bacillus subtilis. В состав гиперосмотической среды для электропорации и среды для восстановления были введены сорбит и маннит. Эффективность трансформации штамма B. subtilis 5434 (не трансформируемого химическими методами) возросла в 430 раз, ее максимальное значение составило 8,6 ⋅ 105 КОЕ/мкг интегративной плазмидной ДНК. При сохранении параметров 25 мкФ, 23 кВ/см, 200 Ом метод был оптимизирован следующим образом: а) бактериальную культуру при культивировании выращивали до достижения значений оптической плотности OD600 около 1,2, что существенно повысило выживаемость бактерий и количество жизнеспособных клеток B. subtilis 5434 после электропорации; б) число элюирований промывочным раствором (гиперосмотической средой для электропорации) электрокомпетентных клеток увеличено с 3 до 5 раз, что привело к значительному снижению электропроводимости гиперосмотической электропорационной среды, содержащей компетентные клетки (электрокомпетентной культуры), и эффективному увеличению времени истекания импульса при той же напряженности электрического поля; в) повышено количество интегративной плазмидной ДНК, вносимой в гиперосмотическую электрокомпетентную культуру. Полученные результаты свидетельствуют, что увеличение числа жизнеспособных клеток B. subtilis 5434 и уменьшение количества ионов металлов в смеси растворов для электропорации (интегративная плазмидная ДНК, компетентные клетки B. subtilis 5434, среда для электропорации) были успешным решением для повышения эффективности трансформации штамма B. subtilis 5434.