Оптимизация условий очистки и рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения Escherichia coli - Жидецкий, Александр Вячеславович; Шолух, Михаил Васильевич; Ханнеман, Юрген Райнер; Хандрик, Рене; Мотылевич, Жанна Витальевна; Химанен, Юха-Пекка (Экспериментальная биология и биотехнология, 2017)
В результате настоящего исследования разработана методика выделения, очистки и рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения Escherichia coli. В основу легли спектрофотометрические, электрофоретические, хроматографические методы, а также рефолдинг методом разведения и на матрице аффинного сорбента. Благодаря оптимизации условий отмывки и солюбилизации телец включения установлены составы отмывочных и солюбилизирующего растворов, позволяющие наиболее полно избавиться от примесных соединений с наименьшими потерями целевого белка, а также провести полную экстракцию целевого белка из растворенных телец включения. В процессе концентрирования и очистки рекомбинантного эфрина-А5 из солюбилизата телец включения c применением металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе удалось получить целевой продукт чистотой 70,3 ± 7,4 % перед проведением рефолдинга. В результате скрининга основных характеристик рефолдинг-буфера для ренатурации рекомбинантного эфрина-А5 была выбрана следующая система: 20 ммоль/л трис-HCl; pH 8; 50 ммоль/л сахарозы; 2,5 ммоль/л DTT; 50 ммоль/л NaCl с конечной концентрацией эфрина-А5 в ренатурирующей системе до 20 мкг/мл и разведением в 10 раз.
Keywords: эфрин-А5; скрининг условий рефолдинга; металл-хелатная хроматография; рекомбинантные белки; тельца включения