Клонирование кДНК глюкоамилазы Aspergillus awamori в дрожжевой интегративный экспрессионный вектор - Кулик, Елена Вячеславовна; Русь , Ольга Борисовна; Евтушенков , Анатолий Николаевич (Экспериментальная биология и биотехнология, 2019)
На основе дрожжевого вектора pKLAC2 сконструирована плазмида pKGLA-1 с кДНК глюкоамилазы гриба Aspergillus awamori 466. В результате проведенного клонирования нуклеотидной последовательности гена glaA в клетках Kluyveromyces lactis GG799 синтезируется рекомбинантный фермент с нативным N-концом. С помощью реакции амплификации целевого гена и рестрикционного анализа генетической конструкции подтверждено успешное создание плазмиды pKGLA-1. Эффективность экспрессии целевого гена в дрожжевых клетках, обусловленной интеграцией экспрессионной кассеты в область промотора LAC4 геномной ДНК вследствие гомологичной рекомбинации, доказана чашечным методом. Рекомбинантные клетки K. lactis росли на селективной минимальной среде с добавлением 5 ммоль/л ацетамида и секретировали глюкоамилазу, о чем свидетельствовали зоны гидролиза крахмала вокруг колоний. Практическое применение сконструированной плазмиды может быть реализовано при создании различных дрожжевых штаммов-продуцентов глюкоамилаз гриба A. awamori с определенными промышленно значимыми свойствами.
Keywords: клонирование; глюкоамилаза; интегративный экспрессионный вектор; Kluyveromyces lactis