Оптимизация методики проведения сайт-направленного мутагенеза с использованием плазмиды pK18mob для бактерий рода Pseudomonas

  • Екатерина Геннадьевна Веремеенко Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь
  • Юлия Александровна Шилова Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь
  • Наталья Павловна Максимова Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь

Аннотация

В результате исследования разработана методика сайт-направленного инсерционного мутагенеза с использованием суицидального интегративного вектора pK18mob для бактерий рода Pseudomonas. Показано, что оптимальное соотношение клеток донора и реципиента составляет 50 : 50. Вместе с тем у бактерий P. chlororaphis, а также их подвидов наблюдается смещение оптимального соотношения в сторону преобладания клеток донора. Использование данной методики позволяет увеличить выход трансконъюгантов более чем в четыре раза, что существенно расширяет возможности по поиску и отбору интересующих исследователя вариантов штаммов. Установлено, что коллекционные штаммы бактерий рода Pseudomonas обладают различными скоростями роста. Продемонстрировано, что в геномах всех исследованных штаммов присутствует ген psrA.

Биографии авторов

Екатерина Геннадьевна Веремеенко, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь

кандидат биологических наук; доцент кафедры генетики биологического факультета.

Юлия Александровна Шилова, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь

аспирантка кафедры генетики биологического факультета.

Наталья Павловна Максимова, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Республика Беларусь

доктор биологических наук, профессор; заведующий кафедрой генетики биологического факультета.

Литература

  1. Katzen F., Becker A., Ielmini V. M., et al. New Mobilizable Vectors Suitable for Gene Replacement in Gram-Negative Bacteria and Their Use in Mapping of the 3′ end of the Xanthomonas campestris pv. campestris gum operon. Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65, No. 1. Р. 278–282.
  2. Garcia B., Olivera E. R. Strategy for Cloning Large Gene Assemblages as Illustrated Using the Phenylacetate and Polyhydroxyalkanoate Gene Clusters. Appl. Environ. Microbiol. 2004. Vol. 2. P. 5019–5025.
  3. Metcalf W. W., Jiang W., Wanner B. L. Use of the rep technique for allele replacement to construct new Escherichia coli hosts for maintenance of R6K gamma origin plasmids at different copy numbers. Gene. 1994. Vol. 138. P. 1–7.
  4. Levitch M. E. Regulation of aromatic amino acid biosynthesis in phenazine-producing strains. J. Bacteriol. 1970. Vol. 103, No. 1. P. 16–19.
  5. Samdrook J., Russel D. W. Molecular cloning: a laboratory manual. 3rd ed. New York, 2001.
  6. Kang Y., Lunin V. V., Skarina T., et al. The long-chain fatty acid sensor, PsrA, modulates the expression of rpoS and the type III secretion exsCEBA operon in Pseudomonas aeruginosa. Mol. Microbiol. 2009. Vol. 73, No. 1. P. 120–136. DOI: 10.1111/j.1365- 2958.2009.06757.x.
  7. Chatterjee A., Cui Y., Hasegawa H., et al. PsrA, the Pseudomonas Sigma Regulator, Controls Regulators of Epiphytic Fitness, Quorum-Sensing Signals, and Plant Interactions in Pseudomonas syringae pv. tomato Strain DC3000. Appl. Environ. Microbiol. 2007. Vol. 73, No. 11. P. 3684–3694.
Опубликован
2017-12-03
Ключевые слова: сайт-специфический инсерционный мутагенез, суицидальный интегративный вектор, трансконъюганты, генно- инженерная конструкция
Как цитировать
Веремеенко, Е. Г., Шилова, Ю. А., & Максимова, Н. П. (2017). Оптимизация методики проведения сайт-направленного мутагенеза с использованием плазмиды pK18mob для бактерий рода Pseudomonas. Экспериментальная биология и биотехнология, 1, 56-61. Доступно по https://journals.bsu.by/index.php/biology/article/view/2429
Выпуск
№ 1 (2017): Журнал Белорусского государственного университета. Биология
Раздел
Генетика, микробиология и молекулярная биология

Авторы, публикующиеся в данном журнале, соглашаются со следующим:

  1. Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и предоставляют журналу право первой публикации работы на условиях лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial. 4.0 International (CC BY-NC 4.0).
  2. Авторы сохраняют право заключать отдельные контрактные договоренности, касающиеся неэксклюзивного распространения версии работы в опубликованном здесь виде (например, размещение ее в институтском хранилище, публикацию в книге) со ссылкой на ее оригинальную публикацию в этом журнале.
  3. Авторы имеют право размещать их работу в интернете (например, в институтском хранилище или на персональном сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению и большему количеству ссылок на данную работу. (См. The Effect of Open Access).