Создание лентивирусного вектора, несущего сегмент GC-богатой промоторной области гибридного онкогена RUNX1RUNX1T1

  • Анна Андреевна Саврицкая Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь
  • Илья Николаевич Ильюшёнок Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь
  • Василий Викторович Гринев Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

Аннотация

Отмечено, что молекулярное клонирование GC-богатых областей генома с помощью полимеразной цепной реакции, равно как и создание на их основе векторных конструкций, может быть нетривиальной задачей. В ходе настоящего исследования осуществлена оптимизация условий амплификации сегмента внутренней промоторной области гибридного онкогена RUNX1-RUNX1T1. Сконструирован многоцелевой лентивирусный вектор второго поколения, несущий вставку данной области. Проанализированы возникшие при работе с целевой последовательностью проблемы и пути их разрешения, на основании чего сформулированы методологические рекомендации по клонированию GC-богатых областей генома.

Биографии авторов

Анна Андреевна Саврицкая, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

студентка биологического факультета. Научный руководитель – В. В. Гринев

Илья Николаевич Ильюшёнок, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

ассистент кафедры генетики биологического факультета

Василий Викторович Гринев, Белорусский государственный университет, пр. Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь

кандидат биологических наук; доцент кафедры генетики биологического факультета

Литература

  1. Döhner H., Weisdorf D. J., Bloomfield C. D. Acute Myeloid Leukemia. N. Engl. J. Med. 2015. Vol. 373, No. 12. P. 1136 –1152.
  2. Müller A. M. S., Duque J., Shizuru J. A., et al. Complementing mutations in core binding factor leukemias: from mouse models to clinical applications. Oncogene. 2008. Vol. 27, No. 44. P. 5759 –5773.
  3. Basecke J., Cepek L., Mannhalter C., et al. Transcription of AML1/ETO in bone marrow and cord blood of individuals without acute myelogenous leukemia. Blood. 2002. Vol. 100, No. 6. P. 2267–2268.
  4. Mori H., Colman S. M., Xiao Z., et al. Chromosome translocations and covert leukemic clones are generated during normal fetal development Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. Vol. 99, No. 12. P. 8242–8247.
  5. Markova E. N., Kantidze O. L., Razin S. V. Transcription of the AML1/ETO chimera is guided by the P2 promoter of the AML1 gene in the Kasumi-1 cell line. Gene. 2012. Vol. 510, No. 2. P. 142–146.
  6. Migas A. A., Mishkova O. A., Ramanouskaya T. V., et al. RUNX1T1/MTG8/ETO gene expression status in human t (8; 21) (q22; q22)-positive acute myeloid leukemia cells. Leuk. Res. 2014. Vol. 38, No. 9. P. 1102–1110.
  7. Sambrook J., Russel W. Preparation and analysis of eukaryotic genomic DNA. Molecular cloning. A laboratory manual. New York : Cold Spring Harbor, 2001. Vol. 1. P. 524 –580.
  8. Gupta R., Wikramasinghe P., Bhattacharyya A., et al. Annotation of gene promoters by integrative data-mining of ChIP-seq Pol-II enrichment data. BMC Bioinformatics. 2010. 11 (Suppl. 1): S65. DOI: 10.1186/1471-2105-11-S1-S65.
  9. Levanon D., Glusman G., Bangsow T., et al. Architecture and anatomy of the genomic locus encoding the human leukemia-associated transcription factor RUNX1/AML1. Gene. 2001. Vol. 262. P. 23–33.
  10. Ghozi M. C., Bernstein Y., Negreanu V., et al. Expression of the human acute myeloid leukemia gene AML1 is regulated by two promoter regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. Vol. 93, No. 5. P. 1935–1940.
  11. Grinev V. V., Radzisheuskaya A. A., Heidenreich O. Effective transgene transfer to human leukemic cells with the second generation lentiviral vector. Vestnik BGU. Ser. 2, Khim. Biol. Geogr. 2008. No. 3. P. 82– 86 (in Russ.).
Опубликован
2018-05-02
Ключевые слова: гибридный онкоген RUNX1-RUNX1T1, молекулярное клонирование, GC-богатая область, полимеразная цепная реакция
Поддерживающие организации Авторы выражают искреннюю признательность Александру Александровичу Мигасу (научный отдел РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии, г. Минск, Беларусь) за помощь в проведении секвенирования по Сэнгеру. Авторы А. А. Саврицкая, И. Н. Ильюшёнок внесли равный вклад в работу.
Как цитировать
Саврицкая, А. А., Ильюшёнок, И. Н., & Гринев, В. В. (2018). Создание лентивирусного вектора, несущего сегмент GC-богатой промоторной области гибридного онкогена RUNX1RUNX1T1. Экспериментальная биология и биотехнология, 3, 38-44. Доступно по https://journals.bsu.by/index.php/biology/article/view/2459
Выпуск
№ 3 (2017): Журнал Белорусского государственного университета. Биология
Раздел
Генетика и молекулярная биология

Авторы, публикующиеся в данном журнале, соглашаются со следующим:

  1. Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и предоставляют журналу право первой публикации работы на условиях лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial. 4.0 International (CC BY-NC 4.0).
  2. Авторы сохраняют право заключать отдельные контрактные договоренности, касающиеся неэксклюзивного распространения версии работы в опубликованном здесь виде (например, размещение ее в институтском хранилище, публикацию в книге) со ссылкой на ее оригинальную публикацию в этом журнале.
  3. Авторы имеют право размещать их работу в интернете (например, в институтском хранилище или на персональном сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению и большему количеству ссылок на данную работу. (См. The Effect of Open Access).